Browsing by Author "Sanchez, Ana Cristina Guadalupe"

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    Propuesta de proceso a nivel de laboratorio para la producción y cuantificación de enzimas betalactamasas, inducibles, utilizando cómo microorganismo productor Bacillus cereus
    (2015-12-01) Sanchez, Ana Cristina Guadalupe; Cuadra Zelaya, Tania Ethel; Torres, David Francisco
    El objetivo fue proponer un proceso a nivel de laboratorio, de producción y cuantificación de enzimas Betalactamasas inducibles, utilizando como microorganismo productor Bacillus cereus. Este estudio podrá ser utilizado como base para realizar investigaciones y obtener las enzimas Betalactamasas a escala semi-industrial para que a largo plazo, la enzima se produzca en nuestro país. El desarrollo experimental se realizó en dos etapas paralelas: la uno denominada producción de la enzima, donde se realizó la reanimación del microorganismo productor, aumento de biomasa y fermentación en medio líquido; la dos, denominada controles en proceso, en la que se midieron los parámetros necesarios para la caracterización del proceso. De acuerdo a los resultados, es posible producir enzimas Betalactamasas inducibles (Penicilinasas) en un medio de cultivo líquido (cultivo en lote) que contenga: glucosa, extracto de levadura, fosfato de sodio dibásico y una solución de sales minerales, a una temperatura de incubación 30 ºC ± 0.5 ºC durante 144 horas. Utilizando Bacillus cereus ATCC 13061 como microorganismo productor y Penicilina G Benzatínica como agente inductor. La mejor actividad betalactamasa de se observó en la muestra de 48 horas, produciendo una actividad betalactamasa de 42.65 UB-Lac/ mL, corroborándose que Bacillus cereus ATCC 13061 es buen productor de enzimas Betalactamasas inducibles en las condiciones ensayadas. Los parámetros cinéticos donde se observó la mayor producción de la enzima fueron aquellos donde la velocidad específica de consumo de sustrato es de -2.07 E-11 g de sustrato Hora-1 Cel-1, con una velocidad volumétrica de consumo de sustrato -0.02 g de sustrato Hora-1 y una velocidad específica de formación de producto 1.05 E-10 U de productoHora-1 Cel-1, Las enzimas Penicilinasas inducibles producidas por Bacillus cereus ATCC 13061 bajo las condiciones establecidas en esta investigación son activas y capaces de llevar a cabo la reacción de degradación enzimática del anillo betalactámico al unirse en con el sustrato antibiótico. Al llevar este método a escala semi-industrial es recomendable establecer un método para la extracción y purificación de enzimas Betalactamasas, además de la realización de estudios de estabilidad a fin de elegir el mejor material de empaque primario para la enzima y establecer su periodo de vida útil. Esta investigación se realizó en las instalaciones del Laboratorio de Biotecnología del Centro de Investigación y Desarrollo en Salud (CENSALUD) de la Universidad de El Salvador.