Estandarización del método PCR para la detección del gen blaTEM-1 de Escherichia coli NCTC 13846.
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Date
2026-03
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Publisher
Universidad de El Salvador
Abstract
La presente investigación tuvo como objetivo la estandarización del método de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección específica del gen blaTEM-1 en la cepa de referencia Escherichia coli NCTC 13846, bajo un enfoque exploratorio y experimental. En la fase exploratoria se analizaron protocolos previos para definir condiciones óptimas, incluyendo concentraciones de cebadores y temperaturas de reacción. En la fase experimental se realizaron pruebas fenotípicas de sensibilidad antimicrobiana mediante galerías MicroScan Neg BP Combo Panel Type 34 y ensayos moleculares para estandarizar el protocolo. La metodología incluyó la extracción de ADN genómico con el kit PureLink™ Genomic DNA Purification, su cuantificación y verificación por electroforesis, así como la evaluación de concentraciones de cebadores entre 0.2 y 10 μM. Las amplificaciones se realizaron en un SimpliAmp™ Thermal Cycler y se verificaron mediante electroforesis en gel de agarosa al 1.5% y secuenciación por el método de Sanger. Los resultados evidenciaron resistencia a antibióticos β-lactámicos y otros grupos. Se determinó que 0.8 μM es la concentración óptima de cebadores, con alta reproducibilidad. La secuenciación confirmó un 100% de identidad con el gen blaTEM-1. Se concluye que el método es sensible, específico y aplicable en microbiología clínica.
Description
16104133
Keywords
Escherichia coli NCTC 13846, ADN genómico